Mutacje somatyczne STAT3 w dużej ziarnistej białaczce limfatycznej AD 7

Komórki, które zawierały gen reporterowy lucyferazy pod kontrolą elementu indukowalnego sis indukującego STAT3 (SIE), transfekowano samym wektorem, STAT3 typu dzikiego lub najczęściej zidentyfikowanymi dwoma mutantami (Y640F i D661V), i każdy warunek był testowany w trzech powtórzeniach. Przy użyciu matrycy HumanHT-12 v4 Expression BeadChip przeprowadzono analizę ekspresji RNA na komórkach posortowanych CD8 + od 8 pacjentów z mutacjami STAT3 (D661H, D661Y, D661V i Y640F) oraz od 10 pacjentów bez mutacji STAT3. Komórki CD8 + od 5 zdrowych ochotników uzyskano dla porównania. INFGR2, IRF7, IRF9, PSMB9, BCL2L1, STAT1, STAT2 i STAT3 były znacząco podwyższone, a SOCS1 został obniżony w próbkach od pacjentów zi bez mutacji STAT3 (Figura 4A). Ekspresja JAK2 była istotnie wyższa tylko u pacjentów z mutacją STAT3, podczas gdy ekspresja interleukiny-6, jednego z głównych regulatorów upstreamu STAT3, nie uległa istotnej zmianie u tych pacjentów, chociaż wartości wahały się szeroko. Nie stwierdzono istotnych różnic w ekspresji BCL2 lub MCL1 w porównaniach między grupami (Figura 4A). Analiza danych dotyczących sekwencjonowania RNA od pacjenta z indeksem z mutacją D661V wykazała podobną regulację w górę docelowych genów STAT3, w tym ligandu FAS (Fig. S7 w Dodatku Uzupełniającym).
Mutacje Y640F i D661V oraz zwiększona aktywność transkrypcyjna STAT3
Aby zbadać funkcjonalne implikacje mutacji Y640F i D661V, wygenerowaliśmy konstrukty ekspresyjne dla wariantów dzikiego typu, Y640F i D661V białka STAT3. Po ekspresji w ludzkich embrionalnych komórkach nerkowych HEK293 niosących gen reporterowy lucyferazy pod kontrolą elementu indukowalnego sis indukującego STAT3 (SIE), mutant Y640F wykazywał uderzająco zwiększoną aktywność zarówno w warunkach stymulacji podstawowej (niestymulowanej), jak i interleukiny-6 ( Figura 4B). Mutant D661V powodował bardziej skromną (ale wciąż istotną) stymulację transkrypcyjną podstawową i stymulowaną interleukiną-6 (Figura 4B).
Dyskusja
Za pomocą całego egzema i ukierunkowanego sekwencjonowania odkryliśmy, że 40% pacjentów z dużą ziarnistą białaczką limfocytową miało mutacje aktywujące w STAT3. Mutacje mutacji STAT3 (D661V, D661Y, D661H, Y640F, N647I i K658N), jak również mutacja insercji (Y657_K658insY), znajdowały się w domenie SH2 na interfejsie dimeryzacji, który pośredniczy w aktywacji STAT3.23 Modelowanie strukturalne wskazało, że wszystkie obserwowane mutacje zwiększyły hydrofobowość powierzchni dimeryzacji STAT3 SH2
[hasła pokrewne: terapia orthokine, terapia orthokineia estetyczna, leczenie ambulatoryjne ]

Powiązane tematy z artykułem: leczenie ambulatoryjne mutacje somatyczne terapia orthokine